产品货号:
GS4969
中文名称:
SAP法免疫组化试剂盒(兔)
英文名称:
SAP IHC Kit(Rabbit IgG)
产品规格:
100T|500T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒采用SAP法,用于细胞或组织切片的免疫组织化学染色,适用于冷冻切片、石蜡切片和细胞涂片。
生物素标记的山羊抗兔IgG与一抗结合,后碱性磷酸酶标记的链霉亲和素与生物素标记的山羊抗兔IgG结合,再加入BCIP/NBT显色液,在AP的催化下,BCIP会被水解产生强反应性的产物,该产物会和NBT发生反应,在组织切片上形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。本试剂盒。
保存:按标签指示条件保存,有效期1年。
相关搜索:SAP法免疫组化试剂盒(兔),免疫组化试剂盒,IHC试剂盒,SAP IHC Kit(Rabbit IgG)
生物素标记的山羊抗兔IgG与一抗结合,后碱性磷酸酶标记的链霉亲和素与生物素标记的山羊抗兔IgG结合,再加入BCIP/NBT显色液,在AP的催化下,BCIP会被水解产生强反应性的产物,该产物会和NBT发生反应,在组织切片上形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。本试剂盒。
- 灵敏度高、特异性强、背景清晰。
- 操作方便,孵育时间短。
组分 | 100T | 500T | 保存 |
试剂A:内源性碱性磷酸酶阻断剂 | 10mL | 50mL | 2~8℃ |
试剂B:封闭液 | 10mL | 50mL | |
试剂C:生物素标记的山羊抗兔IgG | 50μL | 250μL | -20℃ |
试剂D:AP标记的链霉亲和素 | 25μL | 125μL | |
试剂E1:20×BCIP溶液 | 0.5mL | 2.5mL | 2~8℃,避光 |
试剂E2:20×NBT溶液 | 0.5mL | 2.5mL | |
试剂E3:碱性磷酸酶显色缓冲液 | 10mL | 50mL |
保存:按标签指示条件保存,有效期1年。
- 为获得最佳实验结果,请务必优化二抗和AP标记的链霉亲和素的稀释比例以及BCIP/NBT显色时间。
- 本试剂盒适用于绝大多数组织,但对于内源性生物素含量比较丰富的组织(如肾脏、肝脏等),应用非生物素检测系统,或加用avidin封闭。
- 建议在实验过程中设置阳性与阴性对照,以防止假阳性或假阴性的结果。
- 一抗的稀释度、孵育时间、温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度弱时,可提高一抗浓度或延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度或缩短孵育时间,增加洗涤次数或延长洗涤时间。
- 本试剂盒中的NBT对人体有害,操作中应采用合理的防护措施。
- 免疫组织化学染色的准备工作
- BCIP/NBT显色工作液配制
根据显色液用量按以下比例稀释:取900μL碱性磷酸酶显色缓冲液,加BCIP溶液(20×)和NBT溶液(20×)各50μL,混匀,即为BCIP/NBT显色工作液。BCIP/NBT显色工作液须现用现配。 - 生物素标记的二抗的稀释
将生物素标记的二抗按照1:100~1000的比例用TBST进行稀释。根据阳性结果的强弱,其稀释比例可以适当地提高或降低。 - AP标记的链霉亲和素的稀释
将AP标记的链霉亲和素按照1:200~1000的比例用TBST进行稀释。根据阳性结果的强弱,其稀释比例可以适当地提高或降低。
- BCIP/NBT显色工作液配制
- 石蜡切片染色
- 切片常规脱蜡至水。
- 对组织进行相应的抗原修复。
- 滴加100μL内源性碱性磷酸酶阻断剂,室温孵育10~15min,以阻断内源性碱性磷酸酶的活性。
- TBST冲洗,5min×3次。
- 滴加100μL封闭液,室温孵育30~45min,倾去,不洗。
- 滴加适当比例稀释的一抗,37℃孵育2-3h或4℃过夜。
- TBST冲洗,5min×3次。
- 滴加50μL生物素标记的二抗稀释液,室温或37℃孵育30~60min。
- TBST冲洗,5min×3次。
- 滴加50μL AP标记的链霉亲和素稀释液,室温或37℃孵育30~60min。
- TBST冲洗,5min×3次。
- 滴加100μL BCIP/NBT显色工作液,室温显色3~30min,显微镜下观察监测显色情况。蒸馏水冲洗。
- 如果需要,可进行中性红复染。
- 水洗,干燥后水溶性封片剂封片,显微镜观察。
- 切片常规脱蜡至水。
- 血涂片、冰冻切片和细胞切片染色
血涂片、冰冻切片和细胞涂片经固定后,步骤同石蜡切片2~14。
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